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技術(shù)問(wèn)答

活性炭在植物組織培養(yǎng)中的應(yīng)用

發(fā)布時(shí)間:2020-07-23點(diǎn)擊:

目前,活性炭已被廣泛應(yīng)用于植物組織培養(yǎng)中,在許多試驗(yàn)中效果良好,這已有不少報(bào)道,但有關(guān)活性炭作用機(jī)理的研究很少,對(duì)于某種植物的培養(yǎng),加不加活性炭,以及加多少,仍處于摸索和積累經(jīng)驗(yàn)的階段。一般認(rèn)為活性炭通過(guò)吸附而發(fā)生作用,它可以吸附培養(yǎng)基中的有害物質(zhì),包括瓊脂中所含的雜質(zhì),外植體在培養(yǎng)過(guò)程中分泌的酚、醌類等對(duì)外植體自身有害的物質(zhì)以及蔗糖在高壓滅菌時(shí)產(chǎn)生的5-羥甲基糠醛。但活性炭同時(shí)又能吸附生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)、維生素B6、葉酸和煙酸等有益物質(zhì)。因此,需要考慮活性炭的用量。

活性炭在植物組織培養(yǎng)中的應(yīng)用

培養(yǎng)物對(duì)培養(yǎng)基中的添加物,尤其是植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的種類和濃度非常敏感,但關(guān)于活性炭吸附何種物質(zhì)和吸附能力尚缺乏直接和確切的證據(jù)。有報(bào)道說(shuō)IAA和2ip與活性炭結(jié)合得非常快,NAA、KT、BA也能同活性炭結(jié)合。有關(guān)活性炭吸附能力的研究報(bào)告,僅檢索到1988年卜學(xué)賢、陳維倫發(fā)表在植物生理學(xué)報(bào)上的《活性炭對(duì)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的吸附作用》一篇。該論文中說(shuō),在pH3.5~6. 5范圍內(nèi),活性炭吸附BA的能力無(wú)明顯變化。隨著活性炭顆粒的加大,活性炭吸附能力急劇下降。每毫克直徑小于0.13mm的分析純粉狀活性炭大約能吸附100ug左右的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)。這說(shuō)明只需少量的活性炭就可以吸附培養(yǎng)基里常用濃度的。從菊花、雙色磯松、矮牽牛的組培試驗(yàn)可以看出,同時(shí)加有0.5%活性炭和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基與只加有活性炭的培養(yǎng)基相似,不表現(xiàn)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的作用。

在組織培養(yǎng)中活性炭主要用于以下幾個(gè)方面:

一、促進(jìn)芽的增殖、莖和苗的生長(zhǎng)

在莖尖培養(yǎng)和莖段培養(yǎng)時(shí),為防止褐變和有害物質(zhì)的積累,常在培養(yǎng)基中加入適量活性炭。波濤活性炭廠家研究表明,果蔗莖尖培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基中加入0.05%的活性炭對(duì)防止培養(yǎng)基褐變有良好的效果,有利芽的誘導(dǎo)和增殖。在防止褐變方面,研究表明,活性炭的防褐效果優(yōu)于Vc和半胱氨酸。在香蕉莖尖培養(yǎng)時(shí)也發(fā)現(xiàn),活性炭可改善外植體褐變情況,而Vc不僅不能改善外植體褐變情況,反而使其褐化程度加深。但當(dāng)Vc與活性炭配合使用時(shí),其合適的濃度組合卻比只使用相同濃度的活性炭時(shí)更能改善外植體褐變情況,其中機(jī)理尚不清楚,有待進(jìn)一步研究。

在庫(kù)拉索蘆薈芽增殖培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn),將消毒嫩莖接種于附加不同糖、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和活性炭的培養(yǎng)基,當(dāng)活性炭為0.3%時(shí),平均增殖芽30個(gè);當(dāng)活性炭為0.5%時(shí),平均增殖芽41個(gè)。活性炭對(duì)葡萄試管苗的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用,不僅表現(xiàn)在株高和葉片數(shù)上,而且其植株也比對(duì)照生長(zhǎng)健壯、葉色深綠。在成苗培養(yǎng)基上添加0.2~1.0%的活性炭,對(duì)提高成苗率和提高大苗的百分比有著明顯的效果,且在此范圍內(nèi)活性炭的用量與其促進(jìn)效果成正相關(guān);钚蕴窟可促進(jìn)中國(guó)水仙、百合、大花蕙蘭小球莖,馬鈴薯微型薯的形成,加快繁殖速度。但有人認(rèn)為活性炭對(duì)苦楝和臭椿的叢生芽及嫩莖的誘導(dǎo)有抵制作用。

在甜櫻桃組織培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn),甜櫻桃組織培養(yǎng)時(shí)在培養(yǎng)基中加入250mg/L的活性碳,生長(zhǎng)表現(xiàn)很好,試管苗增殖5.1倍,苗高4.5cm;活性炭為500mg/L時(shí),增殖43倍,苗高36cm;當(dāng)活性炭濃度增至750~1000mg/L時(shí),增殖效果明顯下降并受到抵制?梢娫谶m宜的濃度范圍內(nèi),活性炭對(duì)試管苗的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用,而高濃度時(shí),則起抵制作用。

二、用于生根培養(yǎng)基

活性炭廣泛的應(yīng)用是用于培養(yǎng)物的生根。一般認(rèn)為活性炭創(chuàng)造的黑暗環(huán)境有利于根的誘導(dǎo)和根系的生長(zhǎng)。在甜櫻桃組織培養(yǎng)中,添加500~1000mg/L活性炭生根率為95.7%~100%添加2000~4000mg/L活性炭時(shí),生根率大幅度下降,莖的木質(zhì)化程度也隨濃度的增加而增加。不加活性炭的試管苗根系愈傷化加重,根的組織疏松并褐化,需降低生長(zhǎng)素濃度。加入活性炭培養(yǎng)的生根苗移栽成活率均高于對(duì)照,且隨濃度的增加(1000~4000mg/L)成活率由92.6%提高到100%,移栽后6天即產(chǎn)生次生根,莖葉開始生長(zhǎng),而對(duì)照的生根苗成活率僅46.3%。但在梨生根培養(yǎng)基中加入活性炭不僅不能促進(jìn)生根,反而顯著的抵制生根,主要原因可能是活性炭吸附了培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)素。

在蘋果試管苗生根中發(fā)現(xiàn),在培養(yǎng)基中僅含0.5mg/LNAA時(shí),新稍基部產(chǎn)生愈傷組織,沒(méi)有生根;在0.05%活性炭存在條件下,0.5mg/L和3mg/LNAA均未能表現(xiàn)作用,與僅含0.05%活性炭處理相似,附加5.5mg/LNAA能表現(xiàn)一定作用,8mg/LNAA效果較佳。這表明活性炭吸附生長(zhǎng)素,但生長(zhǎng)素濃度大時(shí),被吸附后還有一定剩余,與活性炭同時(shí)發(fā)揮作用。甜柿試管苗生根困難,添加活性炭有利于其生根,且根健壯,移栽易成活,這可能與活性炭能夠提供暗環(huán)境和對(duì)培養(yǎng)基中的代謝有害物質(zhì)的吸收的雙重效應(yīng)有關(guān)。另外在葡萄試管苗生根中,添加活性炭根生長(zhǎng)加快,而且質(zhì)地柔韌不易折斷,對(duì)照的根雖然稍多些,但粗短質(zhì)脆。

三、用于胚培養(yǎng),促進(jìn)成苗

在許多植物的胚培養(yǎng)時(shí),也用到了活性炭。甜柿含酚類物質(zhì)較多,組培時(shí)褐變嚴(yán)重,從而增加了胚培養(yǎng)的難度,需添加抗氧化劑,研究發(fā)現(xiàn),活性炭抗褐化效果比檸檬酸、聚乙烯吡咯烷酮效果都好。在培養(yǎng)葡萄胚珠時(shí)也發(fā)現(xiàn),培養(yǎng)基中加入0.1%活性炭可減輕組織變褐和培養(yǎng)基變色,并產(chǎn)生較少愈傷組織,而不加活性炭則組織變褐,并因產(chǎn)生愈傷組織過(guò)多而死亡。在培養(yǎng)基中加入活性炭能促進(jìn)早熟桃萌發(fā)成正常苗,且促進(jìn)根系生長(zhǎng),幼苗健壯,提高了試管苗的質(zhì)量。

核果類果樹的一些品種,特別是早熟品種的胚往往發(fā)育不全,在胚培過(guò)程中,一般需經(jīng)過(guò)2-3個(gè)月的低溫處理(1~-40℃),才能打破休眠。近年來(lái)一些研究表明,在培養(yǎng)基中加入GA或BA可代替低溫打破休眠。早熟杏胚培養(yǎng)中,活性炭存在情況下,打破休眠所需BA的濃度大幅度提高。在培養(yǎng)基中活性炭為0.02%時(shí),10mg/LBA和5mg/LIAA配合效果較好,成苗率達(dá)到83.3%與對(duì)照相比,幼苗健壯,根系發(fā)達(dá);在培養(yǎng)基中活性炭為0.05%時(shí),上述激素組合,成苗率僅為25%,與20mg/LBA和5mg/LIAA配合成苗率達(dá)50%苗高與0.02%活性炭與10mg/LBA和5mg/LIAA組合無(wú)明顯差異,但根長(zhǎng)明顯高于后者。有人發(fā)現(xiàn),無(wú)活性炭時(shí)僅需0.5mg/LBA即可有效打破杏和蘋果胚的休眠,而在加有200mg/L活性炭的桃幼胚培養(yǎng)基中則需要10mg/L的BA才能打破休眠。

四、用于花藥培養(yǎng)

花藥培養(yǎng)的主要目的是誘導(dǎo)花粉發(fā)育成單倍體,可以快速地獲得純系,縮短育種周期。但實(shí)踐表明,小孢子的啟動(dòng)發(fā)育對(duì)藥壁組織有相當(dāng)大的依賴關(guān)系。目前對(duì)小孢子啟動(dòng)和進(jìn)一步發(fā)育的機(jī)理和條件了解不多,花粉培養(yǎng)難度較大。活性炭用于花藥培養(yǎng)是Nakamura等首先提出的。目前,已經(jīng)在油菜、馬鈴薯、煙草、玉米、黑麥、小黑麥、龍眼、辣椒、甜椒和水稻的花藥培養(yǎng)中得到應(yīng)用。

經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),活性炭對(duì)于水稻花藥培養(yǎng)一次成苗的誘導(dǎo)率、分化率和綠苗率有明顯的抵制作用,可能由于活性炭的吸附作用,小孢子的發(fā)育條件得不到滿足。但對(duì)多級(jí)成苗的生根壯苗有顯著的促進(jìn)作用,可能由于外殖體對(duì)培養(yǎng)基的要求降低,隨代謝增強(qiáng),不斷向培養(yǎng)基中分泌有毒物質(zhì),活性炭通過(guò)吸附培養(yǎng)基中的有毒物質(zhì)而促進(jìn)外殖體的生長(zhǎng)。有人發(fā)現(xiàn)在玉米花藥培養(yǎng)中所有加活性炭的處理的胚狀體分化和綠色小植株產(chǎn)生的百分率均高于未加活性炭的對(duì)照。也有人發(fā)現(xiàn)活性炭(0.5g/)加入玉米花藥培養(yǎng)基中能顯著地提高胚誘導(dǎo)效率。海熱古力(2001)的玉米花藥培養(yǎng)試驗(yàn)也證明活性炭有利于玉米花藥培養(yǎng)。

綜上所述,活性炭主要應(yīng)用于以上四方面,四方面的應(yīng)用中都有積極作用。活性炭對(duì)生長(zhǎng)的影響包括兩個(gè)方面,一是對(duì)根莖生長(zhǎng)的直接作用,其機(jī)理尚不清除;二是通過(guò)間接的吸附作用改變培養(yǎng)基中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的有效濃度。在一定濃度范圍內(nèi),活性炭可發(fā)揮其吸附特性的正效應(yīng),即吸附對(duì)外植體分化發(fā)育有害的物質(zhì);當(dāng)濃度繼續(xù)增加則出現(xiàn)負(fù)效應(yīng),即吸附對(duì)外植體分化發(fā)育有益的物質(zhì)。不同培養(yǎng)物對(duì)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物的要求是不同的,因此,對(duì)不同培養(yǎng)物不同階段的培養(yǎng),要做具體試驗(yàn)來(lái)確定其用量。

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